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鹽析法純化免疫球蛋白技術分析

點擊次數:1459 更新時間:2017-02-14

鹽析法純化免疫球蛋白技術分析 

(一) 原理 
蛋白質在水溶液中的溶解度輪狀病毒Elisa試劑盒是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度,以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質溶液,中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質,于是蛋白質分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時,中性鹽加入蛋白質溶液后,由于離子強度發生改變,蛋白質表面電荷大量被中和,更加導致蛋白溶解度降低,使蛋白質分子之間聚集而沉淀。 
(二) 鹽析的操作步驟 
輪狀病毒Elisa試劑盒取正常人混合血清加等量生理鹽水,于攪拌下逐滴加入與 
稀釋血清等量的飽和硫酸銨

(三) 主要材料 
1. 試劑: 
(1) 正常人混合血清;滅菌生理鹽水。 
(2) 飽和硫酸銨溶液的配制: 
稱(NH4)2SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸餾水500ml溶解,攪拌20分鐘,趁熱過濾。冷卻后以濃氨水(15N NH4OH)調PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨,瓶底應有結晶析出。 
(3) 萘氏試劑配制: 
稱HgI11.5克,KI8克,加蒸餾水至50ml,攪拌溶解后,再加入20%NaOH 50ml。 
(4) 0.02M, PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制: 
貯存液: 
A液:0.2M Na2HPO4:Na2HPO4·12H2O 71.64克,加蒸餾水至1000ml; 
B液: 0.2M NaH2P4:NaH2P4·2H2O 3.12克,加蒸餾水至1000ml; 
應用液:取A液81ml加B液19ml混合,再以生理鹽水作10倍稀釋即成。 
(5) 0.1M, PH7.4磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer PB)配制: 
將上述A液取81ml與B液19ml混合,再以蒸餾水對倍稀釋即成。 
(6) 20%磺基水楊酸。 
2. 器材: 
輪狀病毒Elisa試劑盒普通冰箱、離心機、電磁攪拌器,751桮型紫外分光光度計、扭力天平,粗天平。 
透析袋、尼龍繩、細竹棒、精密PH試紙(PH5.5~9.0)、眼科鑷子、小剪刀。 
燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。 
 

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